顯微鏡是細胞培養(yǎng)及相關衍生實驗中非常重要的儀器。目前,市場上有各種類型的顯微鏡。對于剛剛入行的小白來說,選擇一個符合需求、適用的是一個挑戰(zhàn)。這里我們將介紹倒置顯微鏡、相差顯微鏡、熒光顯微鏡的原理供您選擇。
1.倒置顯微鏡
與普通顯微鏡相比,倒置顯微鏡的物鏡和照明聚光系統(tǒng)以載物臺為軸顛倒,物鏡在載物臺下方,照明系統(tǒng)在載物臺上方。采用這種結構,可以顯著擴大照明聚光系統(tǒng)與載物臺之間的有效距離,便于放置較厚的待觀察器具,如培養(yǎng)皿、細胞培養(yǎng)瓶等。
由于倒置顯微鏡觀察的材料一般是培養(yǎng)的細胞,透明度高,結構反差不明顯,倒置顯微鏡往往配有相差物鏡,實際上構成了倒置相差顯微鏡。
2.相差顯微鏡
在相差顯微鏡檢查時,只有當透射光的波長(顏色)和振幅(亮度)隨周圍介質(zhì)發(fā)生明顯變化時,才能用肉眼分辨出視場中的樣品。當照明光通過無色透明的物體時,透射光的波長和振幅沒有明顯變化,尤其是振幅幾乎不變。因此,當用普通的光學顯微鏡觀察時,很難分辨這種物體的結構。需要通過固色、染色等物理化學方法,使樣品的透射光與背景在波長或振幅上發(fā)生變化,即在顏色和亮度上存在差異,從而進行鑒別。
相差顯微鏡不同于普通的光學顯微鏡,裝置中有四個必不可少的部件:相差顯微鏡(內(nèi)部有相位板)、帶環(huán)形光闌的轉盤聚光鏡、軸對準望遠鏡和綠色濾光片。關鍵是相位差物鏡和環(huán)形光闌,更具體地說是相位板和環(huán)形光闌。光源產(chǎn)生的光通過環(huán)形光闌和聚光器形成環(huán)形光錐,照射待檢物體,產(chǎn)生直射光和衍射光。兩者分別經(jīng)過相位板上的共軛面和補償面,產(chǎn)生干涉。共軛面和補償面上的鍍膜可以使直射光和衍射光的相位分別滯后1/4.導致干涉光的振幅加強和減弱,從而產(chǎn)生亮反差和暗反差。從而即使被檢測的物體沒有被染色也可以被清楚地區(qū)分。
3.熒光顯微鏡
熒光顯微鏡用于研究細胞內(nèi)物質(zhì)的吸收和運輸,化學物質(zhì)的分布和定位等。熒光顯微鏡采用發(fā)光效率高的點光源,通過濾色系統(tǒng)發(fā)出一定波長的光(紫外光365nm或紫外藍光420nm)作為激發(fā)光,激發(fā)標本中的熒光物質(zhì)發(fā)出各種顏色的熒光,再通過物鏡和目鏡的放大觀察。在這樣強烈對比的背景下,即使熒光微弱,也容易識別,靈敏度高。主要用于細胞結構、功能和化學成分的研究。