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可以用熒光顯微鏡同時記錄兩個發(fā)射波長的熒光強度嗎?

作者:admin 瀏覽量:196 來源:本站 時間:2022-12-23 11:47:16

信息摘要:

這種操作是可以實現(xiàn)的,但具體到你的這個設計方案,可能實現(xiàn)不了。先說典型怎么實現(xiàn):你先至少需要一臺研究級熒光顯微鏡,這是因為研究級熒光顯微鏡可以搭配汞燈或者寬光譜大功率LED光源MG-100、四通道LED光源MG-120等寬光譜燈箱,光源可以同時發(fā)射出多個激發(fā)波長。

這種操作是可以實現(xiàn)的,但具體到你的這個設計方案,可能實現(xiàn)不了。先說典型怎么實現(xiàn):至少需要一臺研究級熒光顯微鏡,這是因為研究級熒光顯微鏡可以搭配汞燈或者寬光譜大功率LED光源MG-100、四通道LED光源MG-120等寬光譜燈箱,光源可以同時發(fā)射出多個激發(fā)波長。

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然后你需要配一個雙通熒光激發(fā)塊,比如FISH常用的BG雙通激發(fā)塊,這種激發(fā)塊能同時通過B藍色和G綠色兩種激發(fā)波段,然后實現(xiàn)兩個通道熒光同時發(fā)射,直接形成雙色熒光,就不用切換激發(fā)塊了。

然后來說題主說的情況,ZUI大激發(fā)波長差不多,那么你可能不需要研究級的熒光顯微鏡,由無限遠光學顯微鏡升級數(shù)顯熒光模塊的簡易熒光顯微鏡就夠你激發(fā)了,不能外接燈箱。

簡易熒光顯微鏡,利用整合的數(shù)顯熒光模塊提供激發(fā)光源和配套的激發(fā)塊,不能外接燈箱,因此難以實現(xiàn)雙通激發(fā),但BGU等單通道激發(fā)都是沒有任何毛病的,效果一樣很好,很多醫(yī)院和科研機構(gòu)也在使用。

難點在于發(fā)射波長,發(fā)射波長通常指染料的發(fā)射峰值,在發(fā)射峰值的前后都會有一個光譜范圍屬于發(fā)射波長,如果兩個染料的發(fā)射峰值并沒有差太遠,實際的發(fā)射光就很容易重疊,肉眼或者顯微相機無法區(qū)分這種情況,你可能需要有個積分器或者光譜儀才好辦。

而且回到激發(fā)塊上,如果兩個發(fā)射光差很多,那么簡易熒光顯微鏡可能也搞不了,你可能需要定制一個特殊的熒光模塊來做簡易熒光顯微鏡,或者用研究級寬場熒光,然后定制一個特殊的激發(fā)塊裝上去,比如,DAPI+Fura2,需要U的激發(fā)濾光片,BG雙通的發(fā)射濾光片。

綜上,我感覺不樂觀,因為發(fā)射峰值不是相差很遠的情況下,發(fā)射光很大概率會出現(xiàn)重疊,肉眼和相機都無法區(qū)分這種光譜相近的光,就好比365nm390nm都是紫外,但你不用積分球、光譜儀是很難區(qū)分兩者的。

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