熒光顯微鏡是用短波長的光線照射用熒光素染色過的被檢物體,使之受激發(fā)后而產(chǎn)生長波長的熒光,然后觀察。熒光顯微鏡廣泛應(yīng)用于生物,醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域等。
⑴熒光顯微鏡—般分為透射和落射式兩種類型。
a.透射式激發(fā)光來自被檢物體的下方,聚光鏡為暗視野聚光鏡,使發(fā)光不進入物鏡,而使熒光進入物鏡。它在低倍情況下明亮,而高怕僅暗,在注漫和淘中時,較誰操作,尤以低倍的照明被圍準(zhǔn)于確定,但能得到很暗的視野背景。透射式不使用于非透明的被檢物體。
b.落射式目前幾乎被淘汰,新型的熒光顯微統(tǒng)多為落射式,光源來自被檢動依的上方,在光路中具有分光鏡,所以對透明和不適明的被檢物休體都適用。由于物確起了聚光接的作用,不僅便于操作,而且從低倍到高倍,可以實現(xiàn)整個視場的均勻照明。
(2)熒光鏡檢術(shù)的注意事項
a.激發(fā)光長時間的照射,會發(fā)生光的衰減和淬滅現(xiàn)象,因此盡可能縮短觀察時間,暫時不觀察時,應(yīng)用擋板遮蓋發(fā)光。
b.作油鏡觀察時,應(yīng)用無熒光鏡油"。
c.做熒光實驗,普遍熒光比較弱,應(yīng)在較暗的室內(nèi)進行。電源可裝穩(wěn)壓器,否則電壓不穩(wěn)不僅會降低汞燈的壽命,也會影響效果,目前新研究領(lǐng)域都會用到熒光顯微鏡,如基因原位雜交FISH)等。
熒光拍攝通常需要使用制冷型CCD(成像系統(tǒng)相機),因為制冷CCD可以減少背景噪聲,對弱熒光信號采集很有好處,特別是像單分子成像。采集強光信號不一定要用制冷CCD,可使用黑白相機,彩色相機不適合熒光采集,因為其感光度低、分辨率也低,除非熒光信號很高,對分辯率要求不高或者使用雙通道濾色片時才適合用彩色相機。