熒光顯微鏡是指將紫外線作為光源，使其照射在樣品上，并使得樣品發(fā)光，從而實(shí)現(xiàn)觀察的一種顯微鏡，用于生物領(lǐng)域中研究細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)的吸收、運(yùn)輸、化學(xué)物質(zhì)的分布及定位等的工具。

熒光顯微鏡有兩個(gè)關(guān)鍵的概念，其一是放大倍數(shù)，其二是分辨率。

熒光顯微鏡放大倍數(shù)在熒光顯微鏡的觀察應(yīng)用中，為了獲得良好的結(jié)果，用戶需要對(duì)顯微鏡的放大倍數(shù)有一定的了解，顯微鏡的放大倍數(shù)就是指在我們?cè)陲@微鏡下觀察一個(gè)樣品時(shí)，成像之后比原本放大了多少。

而在熒光顯微鏡中，分辨率剛好與其相反，實(shí)際意義上的分辨率指的是樣品成像之后，圖片能夠呈現(xiàn)出樣品的多少細(xì)節(jié)，這可能是主觀的，在技術(shù)層面上，分辨率受到光的折射特性的限制。

熒光顯微鏡還有一個(gè)概念是級(jí)限分辨率，它指典型的落射熒光照明復(fù)合顯微鏡無法分辨或區(qū)分距離小于200nm的兩個(gè)物體。此外，因?yàn)檎麄€(gè)樣品被同時(shí)照射，所以樣品中所有聚焦和離焦的光線都被檢測(cè)到。這些限制意味著，根據(jù)物鏡中的鏡片，可能能夠確定一個(gè)細(xì)胞中的兩個(gè)不同顏色的探針，但是如果沒有很多對(duì)照、單像素分析和計(jì)算，就無法分辨它們之間的空間關(guān)系。

熒光顯微放大倍數(shù)與標(biāo)尺之間的對(duì)應(yīng)關(guān)系

50x標(biāo)尺每一格代表20μm

100x標(biāo)尺每一格代表10μm

200x標(biāo)尺每一格代表5μm

400x標(biāo)尺每一格代表2.5μm

500x標(biāo)尺每一格代表2μm

1000x標(biāo)尺每一格代表1μm

熒光顯微鏡的物鏡放大倍數(shù)允許有5%的誤差，所以使用前需要校準(zhǔn)，步驟是：把物鏡測(cè)微尺（劃分為100小格，0.01mm/格）放在載物臺(tái)上，然后用相應(yīng)倍率的物鏡和10*刻度目鏡（內(nèi)有0.1mm格值的刻度尺）調(diào)焦成象后，進(jìn)行觀察，物鏡測(cè)微尺與目鏡刻度尺重合的格數(shù)*0.01/目鏡刻度尺的格數(shù)即為物鏡在此倍率下每個(gè)刻度值的實(shí)際長(zhǎng)度。

物鏡和目鏡加在一起標(biāo)定總放大倍數(shù)。用物鏡測(cè)微尺當(dāng)試樣看，上面有個(gè)1mm的尺子，分成100個(gè)小格，一個(gè)小格是10微米。你用帶有目鏡測(cè)微尺的目鏡去量上面標(biāo)尺的長(zhǎng)度，量出來數(shù)值，除以1mm真實(shí)長(zhǎng)度，不就知道放大倍數(shù)了么。經(jīng)常有單位說顯微鏡要讓計(jì)量局來計(jì)量。其實(shí)顯微鏡是分析儀器，不是強(qiáng)檢儀器。有時(shí)計(jì)量局來人計(jì)量，主要就是干這個(gè)活，計(jì)量你的放大倍數(shù)是不是在誤差之內(nèi)。